DNA-synteesin perusperiaate

Kemiallinen DNA-synteesi perustuu kiinteän faasin synteesistrategiaan ja fosforamidiittikemiaan.Biologisesta DNA-synteesistä poiketen kemiallisen DNA-synteesin materiaalina on DMT (4,4-dimetoksitrityyli) ja fosforamidiitilla modifioitu deoksiriboksisidi, kuten kuvassa 1. DNA-synteesi suoritetaan kiinteällä alustalla (voimme tarjota erilaisiaOligo-synteesikolonni), eli CPG (kontrolloitu huokoslasi) ja PS (polystyreeni), ja koko synteesi suoritetaanDNA/RNA-syntetisaattori, joka on päälaitteistomme, on eri mallilla, kuten: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 ja jne, synteesisuunta on 3' - 5' ja nukleotidi viedään kiinteään kantajaan yhden kautta. synteesisykli.Tyypillisesti synteesisykli sisältää neljä vaihetta, suojauksen poisto, kytkentä, korkki ja hapetus (kuva 2).Suojauksenpoisto asetetaan poistamaan DMT-ryhmä kiinteästä kantajasta tai 5'-hydroksyyliryhmä edellisestä nukleosidista, 3-prosenttista trikloorietikkahappoa dikloorimetaanissa käytetään suojauksenpoistoreagenssina.Sitten fosforamidiittimodifioidun deoksiriboksisidin annettiin altistaa hydroksyyliryhmälle aktivaattorin, ts. 5-etyylitiotetratsolin tai 4,5-disyaani-imidatsolin, avulla, jolloin muodostui fosfiittitriesteri (III) ja toteutettiin kytkentävaihe.Korjausvaihe suoritetaan reagoimattoman hydroksyyliryhmän estämiseksi kytkentävaiheen aikana ei-toivottujen vikasekvenssien muodostumisen minimoimiseksi.Lopuksi epästabiili fosfitriesteri (III) hapetetaan kemiallisesti stabiiliksi fosfortriesteriksi (V) jodilla hapettimena pyridiinin läsnä ollessa.

Syntetisoitu DNA voitaisiin pilkkoa kiinteästä kantajasta aminolyysillä, fosfortriesterin 2-syanoetyylisuojattu ryhmä ja nukleoemäksen amidi pilkkoutuvat samanaikaisesti, telineissä olevat synteesilevyt ja synteesikolonnit sijoitetaan suoraan reaktiokammioon. -ltaSuojauksenpoistolaitteet.Raaka-DNA voidaan valmistaa HPLC:llä, elektroforeesilla ja OPC:llä pyynnöstä, voimme myös tarjota sinullePuhdistuslaitteetjälkikäsittelyä varten.