Puhdistuslaitteet oligopuhdistukseen

1. Geelielektroforeesikromatografinen puhdistus
Käytä puhdistukseen denaturoivaa polyakryyliamidigeelielektroforeesikromatografiaa.Denaturoiva aine on yleensä 4 M formamidia tai 7 M ureaa, akryyliamidin pitoisuus on 5-15 % ja metakryyliamidin osuus on pääosin 2-10 %.
Elektroforeesin jälkeen nukleiinihappojuovan sijainti on määritettävä ultraviolettisäteilyn alaisena, kohdenukleiinihapon sisältävä geeli leikataan pois, nukleiinihappo murskataan ja uutetaan, minkä jälkeen liuotusliuos väkevöidään, siitä poistetaan suola, kvantifioitu ja lyofilisoitu.

2. DMT-On, HPLC-puhdistus
Valitse synteesin aikana DMT-On-tila, raakatuote sentrifugoitiin ja konsentroitiin huoneenlämpötilassa ylimääräisen ammoniakin poistamiseksi aminolyysin jälkeen.
Erotus suoritettiin käyttämällä C18-kolonnia, jossa eluenttina oli asetonitriili ja 10 % trietyyliamiini-etikkahappo (TEAA).Kun eluointi on suoritettu loppuun, se konsentroidaan ja sitten DMT-ryhmä poistetaan trifluorietikkahapolla.Neutraloinnin jälkeen osa suoloista ja pienistä molekyyleistä poistetaan katkaistun putken läpi ja lopuksi niistä poistetaan suola.

Tällä menetelmällä voidaan saada korkeampi puhtaus tuote, mutta on tarpeen kiinnittää huomiota depurination esiintymiseen.

3. DMT-Off, HPLC-puhdistus
Valitse DMT-Off synteesin aikana, ja raakatuote sentrifugoitiin ja konsentroitiin huoneenlämpötilassa ylimääräisen ammoniakin poistamiseksi ammonolyysin jälkeen.
Erotus suoritettiin käyttämällä C18-kolonnia, jossa eluenttina oli asetonitriili ja 10 % trietyyliamiini-etikkahappo vedessä.Kun erotus on suoritettu ja kvantifioitu, alikvootit lyofilisoidaan.

Tämä menetelmä vaatii huolellista erotusolosuhteiden säätämistä, ja sillä voidaan myös saada suhteellisen puhtaita kohdemolekyylejä.